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几种溶液的配制方法  

2008-03-10 22:04:33|  分类: 论文写作、投稿、 |  标签: |举报 |字号 订阅

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几种溶液的配制方法

1PBS:

ZLI-9061 PBS溶于1000ml的蒸馏水中,混匀,测pH值应在7.2-7.4之间,若偏离此范围,请用0.1NHCLNaOH调整。

 

2TBS

2.1 Tris缓冲液配方:(0.5 M  pH7.6

Tris(三羟甲基氨基甲烷)

60.57g

1N HCL

420ml

双蒸水

加至1000ml

Tris缓冲液配制方法:

    先以少量双蒸水(300~500ml)溶解Tris,加入HCl后,用HCl1N)或NaOH1N)将pH调至7.6, 最后双蒸水加至1000ml。此液为储备液,4℃冰箱中保存。

2.2 TBS配方:

Tris-HCI缓冲液(0.5M pH7.6

100ml

NaCI

8.5-9g (0.15mol/L)

双蒸水

加至1000ml

TBS配制方法:

先以少量双蒸水溶解NaCl,再加入Tris-HCl缓冲液,最后加双蒸水至1000ml,充分摇匀。

 

3、枸橼酸盐缓冲液(Citrate buffer):

3.1 储存液:

A. 0.1M枸橼酸溶液:称取21.01g枸橼酸(C6H8O7·H20)溶于1000ml蒸馏水中。

B. 0.1M枸橼酸钠溶液:称取29.41g枸橼酸钠(C6H5Na3O7·2H20)溶于1000ml蒸馏水中。

3.2 工作液:

9ml A液和41ml B液加入450ml蒸馏水中,溶液pH值应为6.0±0.1

 

4、胰酶(Trypsin):

4.1 ZLI-9011胰蛋白酶消化液:

常用浓度为0.125%,即使用前将一滴试剂1胰酶溶液和三滴试剂2胰酶稀释液均匀混合(1:3稀释),则可直接滴加使用。胰酶的最终浓度可以根据使用者的要求进行调整,浓度范围可以从0.05%1:10稀释)至0.25%1:1稀释)。

4.2 ZLI-9010胰蛋白酶:

0.05g0.1g胰蛋白酶加入到100ml 0.05%0.1% pH7.8的无水氯化钙水溶液中,溶解即可。

5、胃酶(Pepsin):

4%胃蛋白酶,用0.1mol/L HCL配制。

 

6DAB

6.1 ZLI-9032/9033 DAB Kit

使用前只需将试剂盒提供的ABC三种试剂各一滴加至1ml双蒸水中,即可获得1ml DAB工作液,简单易用。

6.1 ZLI-9030 DAB

6mgDAB溶于10mlTBS0.05M pH7.6),再加入0.1ml浓度为3%的H2O2,过滤掉沉淀物,即可。

7AEC

4mg AEC溶于1ml二甲基甲酰胺中,加入14ml浓度为0.1M的醋酸缓冲液(pH5.2),然后加入0.15ml 3%H2O2,过滤掉沉淀物。

8RIPA

1×PBS1%NP 400.5 sodium deoxycholate0.1% SDS(此液体可长期保存)。以下抑制剂以储存液方式保存,临用前加入RIPA中。

l/mlm8.1 10mg/ml PMSF异丙醇溶液(用量为10

l/mlm8.2 AprotininSigma产品,用量为30

8.3 1000mM sodium orthovanadate冷冻液

l/mlm(用量为10

 

9Blotto A

常规使用1×PBS5% milk0.05% Tween 20

 

10Blotto B

Phosphotyrosine抗体共用,1×PBS1% milk0.05% Tween 20。部分实验中milk可完全去除,但可能引起背景增高。 

常用缓冲溶液的配制方法

1 甘氨酸盐酸缓冲液(0.05mol/L

X毫升0.2 mol/L甘氨酸+Y毫升0.2 mol/L HCI,再加水稀释至200毫升

pH

X

Y

pH

X

Y

2.0

2.4

2.6

2.8

50

50

50

50

44.0

32.4

24.2

16.8

3.0

3.2

3.4

3.6

50

50

50

50

11.4

8.2

6.4

5.0

甘氨酸分子量 = 75.070.2 mol/L甘氨酸溶液含15.01/升。

 

2.邻苯二甲酸盐酸缓冲液(0.05 mol/L

X毫升0.2 mol/L邻苯二甲酸氢钾 + 0.2 mol/L HCl,再加水稀释到20毫升

pH(20)

X

Y

pH(20)

X

Y

2.2

2.4

2.6

2.8

3.0

5

5

5

5

5

4.070

3.960

3.295

2.642

2.022

3.2

3.4

3.6

3.8

5

5

5

5

1.470

0.990

0.597

0.263

邻苯二甲酸氢钾分子量 = 204.230.2 mol/L邻苯二甲酸氢溶液含40.85/

 

3.磷酸氢二钠柠檬酸缓冲液

pH

0.2mol/L Na2HPO4

(毫升)

0.1mol/L

柠檬酸

(毫升)

pH

0.2mol/L Na2HPO4

 (毫升)

0.1mol/L

柠檬酸

(毫升)

2.2

2.4

2.6

2.8

3.0

3.2

3.4

3.6

3.8

4.0

4.2

4.4

4.6

4.8

5.0

0.40

1.24

2.18

3.17

4.11

4.94

5.70

6.44

7.10

7.71

8.28

8.82

9.35

9.86

10.30

10.60

18.76

17.82

16.83

15.89

15.06

14.30

13.56

12.90

12.29

11.72

11.18

10.65

10.14

9.70

5.2

5.4

5.6

5.8

6.0

6.2

6.4

6.6

6.8

7.0

7.2

7.4

7.6

7.8

8.0

10.72

11.15

11.60

12.09

12.63

13.22

13.85

14.55

15.45

16.47

17.39

18.17

18.73

19.15

19.45

9.28

8.85

8.40

7.91

7.37

6.78

6.15

5.45

4.55

3.53

2.61

1.83

1.27

0.85

0.55

Na2HPO4分子量 = 14.980.2 mol/L溶液为28.40/升。

Na2HPO4·2H2O分子量 = 178.050.2 mol/L溶液含35.01/升。

C4H2O7·H2O分子量 = 210.140.1 mol/L溶液为21.01/升。

 

4.柠檬酸氢氧化钠-盐酸缓冲液

pH

钠离子浓度

mol/L

柠檬酸(克)

C6H8O7·H2O

氢氧化钠()

NaOH 97%

盐酸(毫升)

HCl(浓)

最终体积(升)

2.2

3.1

3.3

4.3

5.3

5.8

6.5

0.20

0.20

0.20

0.20

0.35

0.45

0.38

210

210

210

210

245

285

266

84

83

83

83

144

186

156

160

116

106

45

68

105

126

10

10

10

10

10

10

10

     使用时可以每升中加入1克克酚,若最后pH值有变化,再用少量50% 氢氧化钠溶液或浓盐酸调节,冰箱保存。

5.柠檬酸柠檬酸钠缓冲液0.1 mol/L

pH

0.1   mol/L

柠檬酸

(毫升)

0.1   mol/L

柠檬酸钠

(毫升)

pH

0.1   mol/L

柠檬酸

(毫升)

0.1   mol/L

柠檬酸钠

(毫升)

3.0

3.2

3.4

3.6

3.8

4.0

4.2

4.4

4.6

4.8

18.6

17.2

16.0

14.9

14.0

13.1

12.3

11.4

10.3

9.2

1.4

2.8

4.0

5.1

6.0

6.9

7.7

8.6

9.7

10.8

5.0

5.2

5.4

5.6

5.8

6.0

6.2

6.4

6.6

8.2

7.3

6.4

5.5

4.7

3.8

2.8

2.0

1.4

11.8

12.7

13.6

14.5

15.3

16.2

17.2

18.0

18.6

柠檬酸C6H8O7·H2O:分子量210.140.1 mol/L溶液为21.01/升。

柠檬酸钠Na3 C6H5O7·2H2O:分子量294.120.1 mol/L溶液为29.41/毫升。

 

6.乙酸乙酸钠缓冲液(0.2 mol/L

 

pH(18)

0.2   mol/L

  NaAc

(毫升)

0.3   mol/L

 HAc

(毫升)

 

pH(18)

0.2   mol/L

NaAc

(毫升)

0.3   mol/L

HAc

(毫升)

2.6

3.8

4.0

4.2

4.4

4.6

0.75

1.20

1.80

2.65

3.70

4.90

9.25

8.80

8.20

7.35

6.30

5.10

4.8

5.0

5.2

5.4

5.6

5.8

5.90

7.00

7.90

8.60

9.10

9.40

4.10

3.00

2.10

1.40

0.90

0.60

Na2Ac·3H2O分子量 = 136.090.2 mol/L溶液为27.22/升。

 

7.磷酸盐缓冲液

1)磷酸氢二钠磷酸二氢钠缓冲液(0.2

 

pH

0.2   mol/L

 Na2HPO4

(毫升)

0.3   mol/L

 NaH2PO4

(毫升)

 

pH

0.2   mol/L

Na2HPO4

(毫升)

0.3   mol/L

 NaH2PO4

(毫升)

5.8

5.9

6.0

6.1

6.2

6.3

6.4

6.5

6.6

6.7

6.8

6.9

8.0

10.0

12.3

15.0

18.5

22.5

26.5

31.5

37.5

43.5

49.5

55.0

92.0

90.0

87.7

85.0

81.5

77.5

73.5

68.5

62.5

  56.5

51.0

45.0

7.0

7.1

7.2

7.3

7.4

7.5

7.6

7.7

7.8

7.9

8.0

61.0

67.0

72.0

77.0

81.0

84.0

87.0

89.5

91.5

93.0
94.7

39.0

33.0

28.0

23.0

19.0

16.0

13.0

10.5

8.5

7.0

5.3

Na2HPO4·2H2O分子量 = 178.050.2 mol/L溶液为85.61/升。

Na2HPO4·12H2O分子量 = 358.220.2 mol/L溶液为71.64/升。

Na2HPO4·2H2O分子量 = 156.030.2 mol/L溶液为31.21/升。

2)磷酸氢二钠磷酸二氢钾缓冲液(1/15 mol/L

pH

mol/L/15Na2HPO4

(毫升)

mol/L//15KH2PO4

(毫升)

pH

mol/L//15Na2HPO4

(毫升)

mol/L//15KH2PO4

(毫升)

4.92

5.29

5.91

6.24

6.47

6.64

6.81

6.98

0.10

0.50

1.00

2.00

3.00

4.00

5.00

6.00

9.90

9.50

9.00

8.00

7.00

6.00

5.00

4.00

7.17

7.38

7.73

8.04

8.34

8.67

8.18

7.00

8.00

9.00

9.50

9.75

9.90

10.00

3.00

2.00

1.00

0.50

0.25

0.10

0

Na2HPO4·2H2O分子量 = 178.051/15M溶液为11.876/升。

KH2PO4分子量 = 136.091/15M溶液为9.078/升。

 

8.磷酸二氢钾氢氧化钠缓冲液(0.05M

X毫升0.2M K2PO4 + Y毫升0.2N NaOH加水稀释至29毫升

 pH(20)

X (毫升)

Y(毫升)

pH(20)

X (毫升)

Y(毫升)

5.8

6.0

6.2

6.4

6.6

6.8

5

5

5

5

5

5

0.372

0.570

0.860

1.260

1.780

2.365

7.0

7.2

7.4

7.6

7.8

8.0

5

5

5

5

5

5

2.963

3.500

3.950

4.280

4.520

4.680

 

9.巴比妥钠-盐酸缓冲液(18℃

pH

0.04M巴比妥钠溶液

0.2V盐酸

pH

0.04M巴比妥钠溶液(毫升)

0.2N盐酸(毫升)

6.8

7.0

7.2

7.4

7.6

7.8

8.0

8.2

100
100

100

100

100

100

100

100

18.4

17.8

16.7
15.3

13.4

11.47

9.39

7.21

8.4

8.6

8.8

9.0

9.2

9.4

9.6

100

100

100

100

100

100

100

100

5.21

3.82

2.52

1.65

1.13

0.70

0.35

巴比妥钠盐分子量=206.18;0.04M溶液为8.25/

 

10Tris盐酸缓冲液(0.05M25

50毫升0.1M三羟甲基氨基甲烷(Tris)溶液与X毫升0.1N盐酸混匀后,加水稀释至100毫升。

pH

X(毫升)

pH

X(毫升)

7.10

7.20

7.30

7.40

7.50

7.60

7.70

7.80

7.90

8.00

45.7

44.7

43.4

42.0

40.3

38.5

36.6

34.5

32.0
29.2

8.10

8.20

8.30

8.40

8.50

8.60

8.70

8.80

8.90

26.2

22.9
19.9

17.2

14.7

12.4

10.3

8.5

7.0

三羟甲基氨基甲烷(TrisHOCH2    CH2OH

                                            CHOCH2    NH2

分子量=121.14;

0. 1M溶液为12.114/升。Tris溶液可从空气中吸收二氧化碳,使用时注意将瓶盖严。

 

11.硼酸硼砂缓冲液(0.2M硼酸根)

pH

0.05M硼砂(毫升)

0.2M硼砂(毫升)

pH

0.05M硼砂(毫升)

0.2M硼酸(毫升)

7.4

7.6

7.8

8.0

1.0
1.5

2.0

3.0

9.0

8.5

8.0

7.0

8.2

8.4

8.7

9.0

3.5

4.5

6.0

8.0

6.5

5.5

4.0

2.0

硼砂Na2B4O7·H2O,分子量=381.43;0.05M溶液(=0.2M硼酸根)含19.07/升。

硼酸H2BO3,分子量=61.84,0.2M溶液为12.37/升。

硼砂易失去结晶水,必须在带塞的瓶中保存。

 

11.硼酸-硼砂缓冲液(0.2M硼酸根)

pH

0.05M硼砂(毫升)

0.2M硼酸(毫升)

pH

0.05M硼砂(毫升)

0.2M硼酸(毫升)

7.4

7.6

7.8

8.0

1.0

1.5

2.0

3.0

9.0
8.5

8.0

7.0

8.2

8.4

8.7

9.0

3.5

4.5

6.0

8.0

6.5

5.5

4.0
2.0

硼砂Na2B4O7·10H2O,分子量=381.43;0.05M溶液(=0.2M硼酸根)含19.07/升。硼酸H2BO3,分子量=61.84, 0.2M溶液为12.37/升。硼砂易失去结晶水,必须在带塞的瓶中保存。

 

12.甘氨酸氢氧化钠缓冲液(0.05M

X毫升0.2M甘氨酸+Y毫升0.2NnaOH加水稀释至200毫升

pH

X

Y

pH

X

Y

8.6

8.8

9.0

9.2

9.4

50

50

50

50

50

4.0

6.0

8.8

12.0

16.8

9.6

9.8

10.0

10.4

10.6

50

50

50

50

50

22.4

27.2

32.0

38.6

45.5

甘氨酸分子量=75.07;0.2M溶液含15.01/升。

 

13.硼砂-氢氧化钠缓冲液(0.05M硼酸根)

X毫升0.05M硼砂+Y毫升0.2NNaOH加水稀释至200毫升

pH

X

Y

pH

X

Y

9.3

9.4

9.6

50

50

50

6.0
11.0

23.0

9.8

10.0

10.1

50

50

50

34.0

43.0

46.0

硼砂Na2B4O7·10H2O,分子量=381.43;0.05M溶液为19.07/升。

 

14.碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液(0.1M

Ca2+Mg2+存在时不得使用

pH

0.1MNa2CO3(毫升)

0.1MN2HCO3(毫升)

20

37

9.16

9.40

9.51

9.78

9.90

10.14

10.28

10.53

10.83

8.77

9.12

9.40

9.50

9.72

9.90

10.08

10.28

10.57

1

2

3

4

5

6

7

8

9

9

8

7

6

5

4

3

2

1

Na2CO2·10H2O分子量=286.2;0.1M溶液为28.62/升。

N2HCO3分子量=84.0;0.1M溶液为8.40/升。

 

15“PBS”缓冲液

PH

7.6

7.4

7.2

7.0

H2O

NaCl

Na2HPO4

NaH2PO4

1000

8.5

2.2

0.1

1000

8.5

2.2

0.2

1000

8.5

2.2

0.3

100ml

8.5g

2.2g

0.4g

 
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